Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型乳癌患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次再次出现呼吸道致病中间棒状到再次出现1型式肝炎外科病因的实质性赴援在青少年中期就有很好的刻画，多个呼吸道致病中间棒状阳性的青少年中所有70%在血清转换后10年内患上肝炎，而随访15年的青少年这一比重提高到84%。远比，占外科1型式肝炎一半以上的型式1型式肝炎的发病前提还无法给予适当的研究。

越来越多的人开始用作分期子系统来定义1型式肝炎的实质性：形态在再次出现多种呼吸道致病中间棒状时转入第1前期，再次出现血糖间歇性时转入第2前期，再次出现病因时转入第3前期。一些多发呼吸道致病中间棒状阳性的形态，在1期和2期，实质性较慢，并发展为发病的1型式肝炎。我们前刻画了一第各别在首次检查到多种呼吸道致病中间棒状样本后最少10年无肝炎的极慢实质性者，这第各别病征伤亡人数少，但特征极其明确。随后，我们发掘出呼吸道致病特异性CD8+T细胞会中间棒状在实质性较快的病征中所必需不共存，但在近期发病和仍然共存的肝炎病征中所很容易检查到。这也许证明，与实质性病征相比较，这些病征致病中间棒状的调节增强。

以前研究证明，尽管调节性T细胞会(Treg)数目正常，但肝炎病征共存一些功用有缺陷，其中所包括对IL-2的中间棒状并能增高。此外，肝炎病征中所的现象CD4+T细胞会也许对调节更加具抵抗性，乏善可陈为现象T细胞会的诱发减弱，共存产生的Treg和粘液产生的诱发Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞会中所IL-2中间棒状减弱。本研究的目的是刻画了CD4+调节性T细胞会(Treg)在一小群极较快实质性者中所的特征，他们的平均比赴援为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

作法：BOX研究是一项以许多人为基础的两端研究，在21岁以下确诊的病征配偶中所检查1型式肝炎的危险因素。我们前刻画了仍然较快实质性者的特征，他们保持多重呼吸道致病中间棒状阳性超过10年，但无法再次出现肝炎的外科病因，慢性或非进行时性致病。随后，10名之后保持无肝炎并愿意提供大量血液样本的较快实质性者纳入T和B细胞会功用研究。在以外的研究中所，8名慢实质性者(SP第各别)，中所位比赴援43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道致病中间棒状阳性。所有的参与者都处于1型式肝炎实质性的1期，尽管一些人随后无法控制了呼吸道致病中间棒状对某些免疫的阳性，然而，一名病征不太也许处于2期最少6年，但无法再次出现外科病因，一名病征被诊断为肝炎，该患者72岁，在野外物理样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据研究中所对该小分兄进行时了之外评量。复合外周血单个核细胞会(PBMCs)，采用多参数流式细胞会法术和T细胞会诱发检验评量小分兄中所Treg的频赴援、特异性式和功用。用作FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和重生)进行时无监督聚类研究，评量Treg特异性式。

结果：与肥胖症小分兄相比较，来自慢实质性棒状的潜意识CD4+T细胞会的监督聚类辨识，应答的潜意识CD4+ Treg频赴援提高，与糖皮质激素诱发的TNFR方面蛋白(GITR)暗示提高有关。一名HbA1c上升的病征与实质性较快者和匹配的相异第各别相比较，Treg五音各有相同。功用推论结论，与肥胖症小分兄相比较，来自较快实质性棒状的Treg介导的CD4+现象T细胞会诱发明显受损。乏善可陈为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134暗示的诱发提高。

所示1 深入的特异性式研究辨识，CD4+Treg亚型式在慢实质性表头中所提高。由FlowSOM生成的Treg寝室，组织起来在来自所有小分兄的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物暗示解剖出10个元簇:潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用作9个相同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个路由表均是由一个空降兵(100个空降兵)，更加大的元空降兵(10个元空降兵)在路由表第各别区域内上色。每个路由表中所的饼所示问到单个上标的暗示档次。(b)每个元聚类的热所示，以辨识结构上上标暗示。(c, d)为HD第各别(c)和SP第各别(d)生成所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对轻元素为每个metacluster木箱终点站所示(轻元素> 0.05%)考虑到为HD和SP第各别:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞会(l)。红色带子均是由理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon各别小写字母秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模型式证实，Treg频赴援的提高是实质性较快的标志。标准依赖型式(a - f)和柑橘研究(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞会上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的指标性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3掺入，然后通过HLA-DR和GITR暗示进行时复合，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(杂色)第各别以及小分兄SP 606(红色)中所CD25+ cd127的频赴援简介所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型式兄集的木箱终点站所示;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示其中心着色，圆圈突出的簇被辨别为SP和HD表头之间的相同。(j)木箱终点站所示辨识了在SP(杂色)和HD(灰点)第各别中所，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对轻元素(比重)。(k)直方所示辨识每个簇的特异性式(紫色)和Treg上标相对暗示与背景暗示(紫色);上列，存储器Treg_3;前面一路上，存储器Treg_4。背景与所有其他簇中所上标的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon各别小写字母秩检验

所示3 与肥胖症献血者相比较，实质性较快者潜意识treg的GITR提高。每个潜意识CD4+T细胞会元簇(潜意识T细胞会_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞会;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞会;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个暗示上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的暗示热所示(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)的FlowSOM GITR暗示串连，辨识直方所示(c)和简介所示(d)。Wilcoxon各别小写字母秩和检验，p< 0.07(红色)所有小分兄包括，p< 0.05(紫色)小分兄SP 606和匹配的HD不包括在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR暗示，从标准依赖型式，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(红色)串连，辨识直方所示(e)和简介所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon各别小写字母秩检验

所示4 来自较快实质性的CD4+ treg细胞会支配现象CD4+T细胞会的并能增高。SP第各别用紫色的终点站和带子问到，HD第各别用金色的终点站和带子问到，红色的终点站/带子问到小分兄sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重校准。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3同一天进行时流式细胞会法术检查。(a-d)与CD4+接收者者相对应的treg培养(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培养。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE诱发多于(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发多于。用作阳性相异(应答的拥护细胞会内含treg)计算诱发多于。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 现象CD4+T细胞会对较快实质性的T细胞会转化的诱发更加敏感。SP第各别用紫色的终点站和带子问到，HD第各别用金色的终点站和带子问到，红色的终点站/带子问到小分兄sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按观察的比重校准。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培养3同一天进行时流式细胞会法术(CD25反染)和细胞会因兄研究。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者主导培养。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE诱发%-(b)。(c,d) CD25诱发%-(c)和CD134诱发%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中所的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推论的结论是，来自较快实质性兄的转化潜意识CD4+Treg在GITR暗示中所给予了扩张和多样，重申了进一步研究Treg在1型式肝炎危险性形态中所的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28