Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次不止现肾脏自身抗本体到不止现1改进型冠心病病理病征的的发展所部在幼儿中期就有较好的描述，多个肾脏自身抗本体特征性的幼儿中会有70%在血清转换后10年内患上冠心病，而随访15年的幼儿这一%提高到84%。比较于之下，占有病理1改进型冠心病一半以上的改进型1改进型冠心病的中风机制还不能得不到充分的科学研究。

日渐多的人开始用于分期的系统来定义1改进型冠心病的的发展：个本体在不止现多种肾脏自身抗本体时进入第1阶段，不止现体温异常时进入第2阶段，不止现病征时进入第3阶段。一些多发肾脏自身抗本体特征性的个本体，在1期和2期，的发展较慢，并发展为中风的1改进型冠心病。我们之前描述了一个大在首次测定到多种肾脏自身抗本体样本后至多于10年无冠心病的极慢的发展者，这组病征人数多于，但外观上非常一致。随后，我们发现肾脏自身抗原抗体CD8+T蛋白质质子化在的发展减慢的病征中会基本不普遍存在，但在近期中风和长期普遍存在的冠心病病征中会很难以测定到。这不太可能暗示，与的发展病征比较于，这些病征免疫质子化的调节增强。

现代科学研究暗示，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但冠心病病征普遍存在一些基本功能缺陷，其中会还包括对IL-2的质子化能力下降。此外，冠心病病征中会的effectCD4+T蛋白质不太可能对调节更具抵抗性，表现为effectT蛋白质的消除减弱，自然产生的Treg和本体外产生的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T蛋白质中会IL-2质子化减弱。本科学研究的目地是描述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在一个大极减慢的发展者中会的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以青年人相结合的纵向科学研究，在21岁以下确诊的病征亲属中会检查1改进型冠心病的可怕诱因。我们之前描述了长期减慢的发展者的外观上，他们保持多重肾脏自身抗本体特征性超过10年，但不能不止现冠心病的病理病征，慢性或非透过性免疫。随后，10名独自保持无冠心病并愿意获取大量血液样本的减慢的发展者设为T和B蛋白质基本功能统计学。在目前的科学研究中会，8名慢的发展者(SP组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁两者之间的肾脏自身抗本体特征性。所有的行动者都始终保持1改进型冠心病的发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身抗本体对某些抗原的特征性质子化，然而，一名病征并未始终保持2期至多于6年，但不能不止现病理病征，一名病征被诊断为冠心病，该测试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计学中会对该供本体透过了单独风险评估。分离不止来外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多参数流式蛋白质术和T蛋白质消除试验风险评估供本体中会Treg的频所部、遗传基因和基本功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类认定、总括和转回)透过无都由聚类统计学，风险评估Treg遗传基因。

结果：与心理健康供本体比较于，来自慢的发展本体的心灵CD4+T蛋白质的都由聚类揭示，激活的心灵CD4+ Treg频所部提高，与糖皮质激素诱导的TNFR的系统性蛋白(GITR)暗示提高有关。一名HbA1c增高的病征与的发展减慢者和归一化的对照组比较于，Treg谱有所不同。基本功能统计学暗示，与心理健康供本体比较于，来自减慢的发展本体的Treg抗体的CD4+effectT蛋白质消除明显损坏。表现为对effectCD4+T蛋白质CD25和CD134暗示的消除提高。

示意图1 熟悉的遗传基因统计学揭示，CD4+Treg亚改进型在慢的发展队列中会提高。由FlowSOM分解的Treg过道，聚集在来自所有供本体的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标上物暗示认定不止10个元簇:心灵T蛋白质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T蛋白质;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质;文件的系统Treg_1;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;和文件的系统Treg_4。(a)用于9个不同Treg标上分解的10个元簇的MST。每个节点代表一个坦克部队(100个坦克部队)，极大的元坦克部队(10个元坦克部队)在节点组周围上色。每个节点中会的糕点示意图暗示单个标上的暗示层级。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示整本体标上暗示。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)分解示意图，以及FlowSOM识别的每个元簇的大块。(e-l)比较丰度为每个metacluster装入线或示意图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP组:文件的系统Treg_2 (e),文件的系统Treg_3 (f),文件的系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T蛋白质(l)。深红色边框代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频所部的提高是的发展减慢的标志。国际标准旁路(a - f)和柑橘统计学(g-k)比较SP行动者和归一化的HD行动者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异。(a)未成熟CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团本体的纪念性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过分离不止来，演示FlowSOM小团本体。(b) HD(白斑)和SP(蓝点)组以及供本体SP 606(深红色)中会CD25+ cd127的频所部概述示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路子集的装入线或示意图;(c) HLA-DRloGITR−(文件的系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件的系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件的系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件的系统T cell)。(g - i)经济作物簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD队列两者之间的不同。(j)装入线或示意图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比较丰度(%)。(k)数据集揭示每个簇的遗传基因(粉红色)和Treg标上比较暗示与故事情节暗示(红色);上列，文件的系统Treg_3;一个大动身，文件的系统Treg_4。故事情节与所有其他簇中会标上的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选符号秩检验

示意图3 与心理健康献血者比较于，的发展减慢者心灵treg的GITR提高。每个心灵CD4+T蛋白质元簇(心灵T蛋白质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T蛋白质;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白质;文件的系统Treg_2;文件的系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个暗示标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热示意图(sp606不还包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(黑色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)的FlowSOM GITR暗示串联，揭示数据集(c)和概述示意图(d)。Wilcoxon筛选符号秩和检验，p< 0.07(深红色)所有供本体还包括，p< 0.05(红色)供本体SP 606和归一化的HD不还包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从国际标准旁路，从所有HD(黑色)、所有SP(红色)和SP 606(深红色)串联，揭示数据集(e)和概述示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选符号秩检验

示意图4 来自减慢的发展的CD4+ treg蛋白质管控effectCD4+T蛋白质的能力下降。SP组用红色的线或和边框暗示，HD组用紫色的线或和边框暗示，深红色的线或/边框暗示供本体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标上为CFSE, Treg按通过观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培养3紧接著透过流式蛋白质术测定。(a-d)与CD4+需要的话者比较应的treg培养(自本体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百分比。用于特征性对照(激活的响应蛋白质含treg)计算消除百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 effectCD4+T蛋白质对减慢的发展的T蛋白质活化的消除更敏感。SP组用红色的线或和边框暗示，HD组用紫色的线或和边框暗示，深红色的线或/边框暗示供本体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标上，treg按通过观察的%滴定。用抗CD3 /28微珠活化蛋白质，培养3紧接著透过流式蛋白质术(CD25反染)和蛋白质因子统计学。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除%-(b)。(c,d) CD25消除%-(c)和CD134消除%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计学。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得不止结论：我们得不止的得不止结论是，来自减慢的发展子的活化心灵CD4+Treg在GITR暗示中会得不到了扩充和丰富，强调了必要性科学研究Treg在1改进型冠心病风险个本体中会的互补的必要性。

中文翻译不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28